Photo Photo Photo Photo Photo Photo
Print
E-mail
Biotechnology: COMPARATIVE STUDY ON KINETIC PROPERTIES OF FREE AND IMMOBILIZED ASPARAGINASE FROM LOCAL ISOLATE OF Pseudomonase aeruginosa

 

Comparative Study on Kinetic Properties of Free and Immobilized Asparaginase from Local Isolate of Pseudomonase aeruginosa 

Ghazi M.Aziz

Department of Biotechnology, College of Science, University of Baghdad. Baghdad-Iraq.

Abstract

The purified asparaginase from local isolate of P. aeruginosa.was immobilized by gel entrapment using polyacrylamide,agar,sodium alginate,ionic binding on ionexchanger using DEAE-cellulose and immobilized in gelatin by cross-linking with glutaraldehyde.

The later method was the most efficient method for immobilization since the immobilized enzyme retained about 53.5% of original activity of free enzyme. The optimal pH for immobilized enzyme activity was 7.5 and the enzyme was most stable at pH 6-8.5, while the values of optimal pH for activity and Stability of free enzyme were 8.5 and (7.5-8) respectively. The immobilized enzyme retained its original activity when incubated at   25-45C° for 30 min., while the free enzyme retained its original activity after 30 min. at 25-37C°. The obtained values of Michaelis constant (Km) and Vmax for immobilized enzyme were 0.46×10-4 M and 12.2 µM/min.,respectively ,and the Km and Vmax for free enzyme were 0.25×10-4 M and 16.7 µM/min,respectively. The immobilized enzyme was highly specific towards L-asparagine and L-glutamine. The free and immobilized enzyme retained about 90.2% and 51% of its original activity after 3 weeks of storage at 4 C°.


 

دراسة مقارنة للصفات الحركية للاسباراجينيز(L-asparaginase) الحر والمقيد من العزلة المحلية Pseudomonase aeruginosa 

غازي منعم عزيز

قسم التقنيات الاحيائية، كلية العلوم، جامعة بغداد. بغداد- العراق.                      

الخلاصة

اختبرت خمس طرائق لتقييد الاسباراجينيز المنقى من العزلة المحلية لبكتريا P.aeurginosa تمثلت بالحجز في هلام الاكريل امايد والاكار والجينات الصوديوم والربط العرضي للجيلاتين المعامل بالكلوتر الديهايد والربط الايوني بالمبادل الايوني DEAE-cellulose .ودلت النتائج ان التقييد بالجيلاتين المعامل بالكلوترالديهايد افضل هذه الطرائق حيث احتفظ الانزيم المقيد بـ53.5%من فعالية الانزيم من فعالية الانزيم الحر . وكانت قيم الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم المقيد مساوية الى 7.5 و(6-8.5) ،على التوالي والانزيم الحر عند القيم 8.5 و(7.5-8)على التوالي. واحتفظ الانزيم المقيد بكامل فعاليته عند حضنه لمدة 30 دقيقة في درجات حرارة من 25-45م° والانزيم الحر عند حضنه في درجات حرارة من 25-37 مº. درست الثوابت الحركية للانزيم وظهر ان قيم ثابت ميكاليس Km والسرعة القصوى Vmax للانزيم المقيد كانت 0.46× -410 مولار و 12.2 مايكرومولار/دقيقة بينما للانزيم الحر بلغت 0.25× 4-10 مولار و16.7 مايكرومولار/دقيقة ،واظهر الانزيم المقيد تخصصا تجاه مادتي التفاعل L-asparagine  و L-glutamine واحتفظ كل من الانزيم المقيد والحر بحوالي 90.2%و51%من فعاليتهما الاصلية بعدالاسبوع الثالث من الخزن في درجةحرارة 4 م°.





alt







 

 

S5 Box

Login



Register

*
*
*
*
*

Fields marked with an asterisk (*) are required.