Photo Photo Photo Photo Photo Photo

Print
E-mail
Biotechnology: ISOLATION AND IDENTIFICATION OF CHOLESTEROL OXIDASE PRODUCING Pseudomonas Aeruginosa

 

Isolation and Identification of Cholesterol Oxidase Producing Pseudomonas Aeruginosa

 

Hameed M. Jasim, Saddam Y. Diwan

Department of Biotechnology, College of Science, Al Nahrain University. Baghdad-Iraq.

 

Abstract

     Cholesterol oxidase (EC:1.1.3.6) is industrially and commercially important for the application in bioconversions for clinical determination of total or free serum cholesterol, and in food industry, for this reason this study was aimed to isolate cholesterol oxidase producing Pseudomonas aeruginosa from different local sources, by taking 55 swap samples from different serological samples includes ears, urine, burns, wounds and sputum, in addition to another 35 environmental samples collected from soil and water from different locations in Baghdad governorate. From these samples 115 bacterial isolate were obtained, and among them only 60 isolate were identified as P. aeruginosa according to the results of biochemical tests and Api 20E system. Ability of these isolates in cholesterol oxidase production was screened in Lauria-Broth medium. Results showed that all of these 60 isolates were able to produce cholesterol oxidase with variable capacities, among them P.aeruginosa H48 was the most efficient isolate in enzyme production. The activity of crude enzyme in culture filtrate of this isolate was 1.71 U/ml. Cholesterol oxidase produced by P.aeruginosa H48 was purified by ammonium sulphate precipitation (70% saturation), dialysis and ion exchange chromatography using CM–cellulose.The enzyme activity of the partially purified enzyme was increased to 3.87 U/ml. Optimum pH and temperature for activity and stability of the partially purified enzyme were estimated. Results showed that the Optimum pH for enzyme activity and stability was pH7.0 and pH 6.5 respectively, while the optimum temperature for enzyme activity and stability was 35 and 37°C respectively.

 

عزل وتشخيص بكتريا Pseudomonas aeruginosa المنتجة لإنزيم
كولسترول أوكسيديز

 

حميد مجيد جاسم، صدام يحيى ديوان

قسم التقنيات الاحيائية، كلية العلوم، جامعة النهرين. بغداد-العراق.

 

الخلاصة

     يعد إنزيم كولسترول أوكسيديز من الإنزيمات المهمة اقتصاديا في تطبيقات التحول الحيوي في التقديرات السريرية لكولسترول مصل الدم الكلي والحر وفي الصناعات الغذائية، لذا فقد هدفت هذه الدراسة إلى عزل بكتريا Pseudomonas aeruginosa منتجة لإنزيم كولسترول أوكسيديز من مصادر محلية مختلفة وذلك بأخذ 55 مسحة من نماذج سريرية مختلفة شملت عينات الأذن والادار والحروق والجروح والقشع بالإضافة إلى 35 عينة بيئية مختلفة جمعت من التربة والمياه من مواقع مختلفة في محافظة بغداد، وقد تم الحصول على 115 عزلة بكتيرية من هذه النماذج شخصت 60 عزلة منها على أنها P. aeruginosa على ضوء نتائج الاختبارات الكيموحيوية ونظام التشخيص باستخدام العدة التشخيصية Api 20E . درست قابلية هذه العزلات على إنتاج إنزيم كولسترول أوكسيديز، وقد أشارت النتائج إلى إن جميع هذه العزلات كانت منتجة للإنزيم وبدرجات متفاوتة, تميزت من بينها العزلة   H48 P. aeruginosa بكفاءتها العالية في إنتاج الأنزيم,حيث بلغت فعالية الإنزيم في رائق مزرعتها البكتيرية 1.17 وحدة/مل. تم تنقية إنزيم كولسترول أوكسيديز المنتج من العزلة H48 P. aeruginosa بالترسيب أولا باستخدام كبريتات الامونيوم بنسبة إشباع %70، ثم الديلزة، ثم التنقية بالتبادل ألايوني باستخدام المبادل كاربوكسي مثيل سليلوز، وقد بلغت فعالية الإنزيم المنقى بعد هذه الخطوات3.87 وحدة/مليلتر. قدر الرقم الهيدروجيني الأمثل والدرجة الحرارية المثلى لفعالية وثبات الإنزيم، وقد أشارت النتائج إلى إن الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية وثبات الإنزيم هو 7.0 و6.5 على التوالي، بينما كانت الدرجة الحرارية المثلى لفعالية وثبات الإنزيم 35 و° 37م على التوالي.






alt


 

S5 Box

Login



Register

*
*
*
*
*

Fields marked with an asterisk (*) are required.