Photo Photo Photo Photo Photo Photo

Print
E-mail
Biotechnology: STUDY OF OPTIMUM CONDITIONS IN DETECTION OF ABO GENOTYPE BY SIMULTANEOUS PCR-RFLP METHOD

 

Study of Optimum Conditions in detection of ABO genotype by simultaneous PCR-RFLP method

 

Ahmed Kazem Mohammed*، Ammirah Jaber Omar*، Mohammed Ibrahem Nader. **

* Medico-Legal Institute , Baghdad-Iraq.

**Genetic Engineering and Biotechnology institute, University of Baghdad, Baghdad-Iraq.

                                    

Abstract

Extracted of DNA from blood samples, and amplification two separate segments of the glycosyl transferases gene containing nucleotide 261 in exon 6 and nucleotide 703 in exon 7 of ABO gene locus were amplified . ABO locus gene was amplified by using two sets of specific primers for ABO locus as a whole. The first set includes the primer pair (1 and 2) that was used for the amplification of 200 bp DNA fragment, which contains the nucleotide 261. The second set includes the primer pair (3 and 4) that was used to amplify a 128 bp DNA fragment, which contains the nucleotide703. Nucleotides 261 and 703 were used to distinguish A , B, O alleles by restriction enzyme digestion of the PCR products. The amplified DNA products were then run on 2% agarose gel .Two types of restriction enzyme were used. The first was KpnI which determined the deletion at nucleotide 261(G→ - ) of O allele, while the second one was AluI which determined the substitution in nucleotide 703 ( G → A ) that detect B allele which can be recognized from A allele (AluI digest the DNA of individual with type B allele). Digested DNA fragments were run on 6% low melting agarose. The thirty samples show 14 ( A )blood group, 13 of them are Heterozygous AO and one is Homozygous AA . The 14 samples are blood group B, 13 of them are Heterozygous BO and one of them is Homozygous BB. One sample for AB, O blood groups this type have only Homozygous phase and each gene are dominant in AB type so called co-dominant. In O type the gene is recessive and expressed only in Homozygous type only whereas the A and B genes are dominant over O.

 

 

دراسة الظروف المثلى لتشخيص انماط الوراثية لمجاميع الدم ABO باستخدام

طريقة PCR-RFLP

احمد كاظم محمد*، عامرة جابر عمر* ، محمد ابراهيم نادر**        

*معهد الطب العدلي ، وزارة الصحة ، بغداد - العراق.

**معهد الهندسة الوراثية و التقنيات الاحيائيه ، جامعة بغداد، بغداد- العراق.

 

الخلاصه

عزلت المادة الوراثية بطريقتين ,الطريقة اليدوية باستخدام عدة العزل وكانت ذات تركيز عالي نسبيا (10 – 5 ميكروغرام ) لكنها بنقاوة دون المثالية (3.3 – 0.9 ). ضبط تركيز المادة الوراثية بما يلائم طريقة تفاعل التضاعف التسلسلي (PCR). تم مضاعفة قطعتان من جين ABO ,القطعة الاولى في الاكسون 6 تتضمن النيوكليوتيد 261 , والقطعة الثانية في الاكسون 7 والمتضمنة النيوكليوتيد 703 ( جين ABO يتكون من 7 اكسونات و 6 انترونات) باستخدام تسلسلات من بادىء البلمرة ( Primers )مخصصة لمضاعفة قطعتان تمثل جين ABO بجميع اليلاته. المجموعة الاول يتضمن زوج البوادئ (1و2) التي نتجَ من مضاعفة القطعة الاولى 200 زوج قاعد والذي يتضمن النيوكليوتيدات 261   بينما نتج عن المجموعة الثانية من زوج البوادئ (2 و3) مضاعفة القطعة 128 زوج قاعدة والمتضمنة النيوكليوتيدات 703.  فصلت نواتج PCR على 2% من هلام بأستخدام النيوكليوتيدات 261 و 703 لتميز اليلات مجاميع الدم A,B,O بواسطة أنزيمات التقييد. أستخدمت نوعين من أنزيمات التقييد الاولKpnI الذي يحدد الطفرة الوراثية (الحذف) الموجود عند النيوكليوتيد 261 بينما الانزيم الثاني AluI فيحدد الطفرة الوراثية ( الاستبدال ) الموجودة في النيوكليوتيد 703 , تم ترحيل ناتج عملية الهضم بانزيمات التقييد على 6% من هلام الاكاروز واطىء الانصهار لمشاهدة جميع القطع الناتجة من عملية الهضم ومقارنتها مع الحامض النووي القياسي السلمي.


 

أظهرت طريقة التحري الجزيئي PCR-RFLP للتحري عن صنف الدم ABO ان من مجموع 14 نموذج صنف دمهم A كان 13 منهم ذوي طرز وراثية هجينة AO وواحد فقط ذو طرز وراثي متجانس AA , بينما كان 14نموذج صنفهم B , 13 منهم ذوي طرز وراثية هجينة BO وواحد فقط ذو طرز وراثي متجانس BB. نموذج واحد فقط لكل من صنف الدم AB ,O حيث كانوا متجانسي الطرز الوراثية , يعتبر صنف   AB ذات سيادة مشاركة لأن كلا الاليلين يشفرون لصفاتهم على سطح كرية الدم الحمراء أما بالنسبة للصنف O فهو ذات اليلات متنحية لاتظهر الا في حالة Homozygous وهي متنحية أمام الاليلات Aو B . خلصت الدراسة الى ان طريقة PCR-RFLP هي سريعة ,عملية ,قليلة التكلفة وسهلة في قراءة النتائج. ممكن ان تستغل في الطب العدلي الجنائي , في فحص البنوة وبعض حالات نقل الدم الدوري في مصرف الدم.

 







alt


 

 

S5 Box

Login



Register

*
*
*
*
*

Fields marked with an asterisk (*) are required.