أستخلاص وتنقية وتوصيف أنزيم Cytosine deaminase
من خميرة الخبز Saccharomyces cerevisiae
محمد ابراهيم نادر* ، صفاء عبد لطيف * ، لميس محمد رياض**
* معهد الهندسة الوراثية والتقنية الحياتية للدراسات العليا ، جامعة بغداد، بغداد- العراق.
** قسم القنية الاحيائية ، كلية العلوم ، جامعة بغداد، بغداد- العراق.
الخلاصة
أستخلص أنزيم السايتوسين دي أمنيز من خلايا خميرة الخبز الجاهزة بأستعمال المذيب العضوي التولوين إذ بلغت الفعالية النوعية للمستخلص الخام (9.6) ملي وحدة / ملغرام بروتين ونقي الأنزيم بخطوات عدة تضمنت الترسيب بأستعمال كبريتات الأمونيوم و بنسب إشباع مختلفة و بينت النتائج أن أفضل نسبة إشباع كانت ( 60%) إذ بلغت الفعالية النوعية (12.5) ملي وحدة / ملغرام بروتين وعدد مرات تنقية (1.302) مرة, والحصيلة الأنزيمية 4.82%, مرر المحلول الأنزيمي على عمود المبادل الآيوني DEAE-Cellulos, وكانت الفعالية النوعية (358) ملي وحدة / ملغرام بروتين وعدد مرات تنقية (37.29) مرة وحصيلة أنزيمية 2.55%, وبعدها مرر المحلول الأنزيمي على عمود هلام سيفادكس G-200, إذ بلغت قيمة الفعالية النوعية (400) ملي وحدة / ملغرام بروتين, وبعدد مرات تنقية (41.66) مرة, وحصيلة أنزيمية 1.19%.
Extraction, Purification AnD CHARACTERIZATION OF CYTOSINE DEAMINASE From Saccharomyces cerevisiae
Mohammed .I.Nader *, Safaa Abed Lateef Al-Maeny* , Lamees M. R. Abbas**
* Genetic Engineering and Biotechnology، Institute for Post graduate Studies، Baghdad - Iraq.
**Biotechnology Department، Collage of Sciences – University of Baghdad, Baghdad - Iraq.
Abstract
The cytosine deaminase was extracted by using organic solvent toluene and the value of specific activity of crude extract was (9.6) mu/mg protein . The enzyme was purified in few steps including precipitating the enzyme by using ammonium sulfate at defferent saturation percent, The optimum percent was 60% saturation percent which gave value of specfic activity of (12.5) mu/mg protein fold of purification was (1.302) times and the yield was 4.82% . Then the enzume solution was passed through DEAE – cellulose column chromatography. The peaks was collected and the value of specific activity was measured which was (358) mu/mg protein, fold of purification was (37.29) times, and the yield was (2.55)%. The enzyme solution was concentrated and passed through sephadex G-200 gelfilteration and the value of specific activity was (400) mu/mg protein, fold purification (41.66) times and yeid was 1.19%.